Иммуномодуляторы для пациентов с гемобластозами
Роль иммуномодуляторов в снижении токсического действия полихимиотерапии у пациентов с гемобластозами
2. Материал и методы исследования.
РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Всего в исследование было включено 50 пациентов с гемобластозами, из них 20 больных с острыми лимфо- и миелобластными лейкозами (ОЛЛ,ОМЛ), 15 больных с неходжкинскимилимфомами (НХЛ), 8 – с лимфомойХоджкина (ЛХ) и 7 – множественной миеломой (ММ) с подтвержденным гистологически, ИГХ и методом иммунофенотипирования (ИФТ).
Таблица 1. Характеристика пациентов в основной группе (n=50)
Пол Мужчины Женщины
21 29
Средний возраст 53,5 55,5
54,5
Оценку эффективности проводили методом сравнения показателей иммунного статуса до назначения Бета-глюкана, т.е. во время скрининга и каждый месяц, в течение трех месяцев.
Уровни показателей иммунограммы: (CD3,CD4,CD8,ИРИ,NK,CD19,CD3+HLA-DR+(T),CD3-HLA-DR+(B,NK), CD16+56) сравнивали в основной группе до начала исследования и по истечении 30, 60 и 90 дней. Данные представлены в таблице 2, и также в диаграммах 1-7.
Таблица 2. Динамика показателей иммунограммы по истечении 30 дней терапии
Показатель Основная группа
(n=50, ммоль\л)
Скрининг После месяца терапии
CD3 49,2±7,5 50,2±7,6
CD4 29,7±5,2 29,2±3,3
CD8 31,2±5,3 30,7±2,4
ИРИ 1,1±0,2 1,1±0,3
NK 22,3±2,8 19,1±2,7
CD19 15,5±7,4 15,3±4,2
CD3+HLA-DR+(T) 14,3±2,3 14,3±2
CD3-HLA-DR+(B,NK) 26,3±2,1 26,1±1,3
CD16+56 5,2±1,9 5,2±1,4
В целом исследование особенностей иммунного статуса больных, имеющих онкопатологию, проводили до начала проведения химиотерапии.
Состояние клеточного иммунитета у больных с установленным диагнозом онкологического заболевания характеризовалось повышением абсолютного содержания лимфоцитов и снижением относительной концентрации Т-клеток. У больных выявлено снижение величины соотношения CD4/CD8, а также увеличены показатели содержания активированных Т-, В-лимфоцитов и натуральных киллеров.
Как видно из представленных в таблице выше данных, после месяца применения Бета глюкана произошло улучшение таких показателей иммунограммы как:
NK-ρнабл>ρкрит, зависимость признаков статистически значима (p<0,05).Это может свидетельствовать о том, что наблюдается снижение «агрессивности» иммунной системы, т.е. уже по истечении месяца употребления Бета-глюкана происходит нормализация иммунного ответа.
По ниже приведенным показателям иммунограммы статистически значимых изменений после 30 дней приема Бета-глюкана выявлено не было.
Далее пациенты продолжили прием Бета-глюкана еще в течение месяца и по окончании 2 курса также были оценены показатели иммунограммы. Динамика показателей иммунограммы по окончании 60 дней терапии представлена в таблице 3.
Таблица 3. Динамика показателей иммунограммы по истечении 60 дней терапии
Показатель Основная группа
(n=50, ммоль\л)
После месяца терапии
После 2-го месяца терапии
CD3 50,2±7,6 52,02±7,2
CD4 29,2±3,3 28,1±3,1
CD8 30,7±2,4 29,4±1,7
ИРИ 1,1±0,3 1,2±0,3
NK 19,1±2,7 17,9±2,6
CD19 15,3±4,2 15,1±4,1
CD3+HLA-DR+(T) 14,3±2 14,1±1,8
CD3-HLA-DR+(B,NK) 26,1±1,3 24,1±2,2
CD16+56 5,2±1,4 5,2±1,8
При анализе полученных данных было выявлено, что происходит улучшение и других показателей иммунограммы, отвечающих как за клеточный, так и за гуморальный иммунитет. После месяца терапии в показателях иммунограммы статистически значимых изменений выявлено не было
Далее больным была продолжено применение Бета-глюкана еще в течении месяца. По прошествии 30 дней была проведена заключительная оценка показателей иммунограммы. Динамика показателей иммунограммы после 90 дней терапии представлена в таблице 4.
Таблица 4. Динамика показателей иммунограммы по истечении 90 дней терапии
Показатель Основная группа
(n=50, ммоль\л)
После 2-го месяца терапии После 3-го месяца терапии
CD3 52,02±7,2 53,1±8
CD4 28,1±3,1 26,9±3,6
CD8 29,4±1,7 27,2±2,1
ИРИ 1,2±0,3 1,2±0,3
NK 17,9±2,6 17,5±2,3
CD19 15,1±4,1 14,9±3,6
CD3+HLA-DR+(T) 14,1±1,8 14,1±2,2
CD3-HLA-DR+(B,NK) 24,1±2,2 22,2±2,1
CD16+56 5,2±1,8 5,4±1,9
По результатам проведенного исследования иммунитета было выявлено дальнейшее улучшение уровней клеточного и гуморального иммунитета. Причем, стойкая положительная динамика была выявлена у пациентов с наиболее «грубыми» нарушениями в иммунограмме.
Исследование фагоцитарной активности в динамике
Оценка фагоцитарной активности нейтрофиловметодом регистрации хемилюминесценции в присутствии люминола и НСТ-тестом проводилась дважды, до исследования и через 90 дней применения Бета-глюкана. Результаты обоих тестов показали большой разброс данных, что обусловлено различной чувствительностью тестов, а также, возможно, сложностью и недостаточной изученностью механизмов хемилюминесценции нейтрофилов. НСТ-тест выявил незначительный динамический диапазон определяемой клеточной активности. По-видимому, это связано с использованием в процессе выделения нейтрофилов хлористого аммония, модифицирующего клеточную активность, либо с недостаточной концентрацией индуктора и/или его антигенными свойствами [4].
Проведенный анализ полученных данных указывает на необходимость дополнительного углубленного изучения активности фагоцитоза при помощи метода хемилюминесценции с люминолом, с разработкой схемы исследования с краткосрочными интервалами между тестами, и более точной выборкой пациентов.
В исследовании фагоцитарной активности в течении периода терапии наблюдается активация процессов, но динамическая оценка результатов не является статистически значимой, так как требует участия большего числа респондентов. Активация процессов происходит в показателе «индекс переваривающей способности фагоцитов пациентов, который оценивался по интенсивности свечения фагоцитировавших клеток через 3 часа инкубации. В течении периода наблюдения он колебался с 78,9%±7,3 до 80,2 %±5,3.
Исследование безопасности.
В основной группе отмечена хорошая переносимость Бета глюкана, побочных эффектов отмечено не было. По лабораторным показателям оценивались биохимические показатели (АЛТ, АСТ, общий билирубин, общий белок, глюкоза, креатинин, мочевина) во время скрининга и в течении трех месяцев применения Бета-глюкана. Сравнивались результаты биохимических исследований с контрольной группой (30 человек), не принимавших Бета- глюкан (ретроспективно, пациенты с гемобластозами). В контрольной группе в сравнении с основной оценивались только показатели АЛТ, АСТ, общего билирубина, для того, чтобы оценить возможное положительное антитоксическое действие Бета-глюкана на клетки печени. Данные биохимического анализа крови пациентов во время скрининга и в течении трех месяцев применения Бета-глюкана представлены в таблицах 5-7, а также в диаграммах 10 – 16.
Таблица 5. Динамика биохимического анализа крови у пациентов основной группы (первый месяц терапии) и скрининг данные (АЛТ, АСТ, общий билирубин) в контрольной группе.
№ Показатели общего анализа крови Основная группа(n=50) Контрольная группа (n=30)
День 0 День 30 День 0
1 АЛТ (ммоль\л) 20,1±7,8 18,9±6,7 25,7±7,8
2 АСТ (ммоль\л) 20,7±5,7 19,3±5,3 22,9±6,7
4 Общий белок (ммоль\л) 73,2±9,8 74,1±8,6 -
5 Глюкоза (ммоль\л) 5,3±1,3 5,2±1,4 -
6 Креатинин (ммоль\л) 61±10,4 62,3±1,4 -
7 Мочевина (ммоль\л) 4,1±1,3 4,2±1,2 -
Таблица 6. Динамика биохимического анализа крови у пациентов основной группы (второй месяц терапии)
№ Показатели общего анализа крови Основная группа(n=50)
День 30 День 60
1 АЛТ (ммоль\л) 18,9±6,7 17,8±6,9
2 АСТ (ммоль 19,3±5,3 17,9±5,5
3 Общий билирубин 16,7±2,9 16,5±3,9
4 Общий белок (ммоль\л) 74,1±8,6 71,7±8,8
5 Глюкоза (ммоль\л) 5,2±1,4 5,2±1,6
6 Креатинин (ммоль\л) 62,3±1,4 62,02±1,2
7 Мочевина (ммоль\л) 4,2±1,2 3,9±1,0
Таблица 7. Динамика биохимического анализа крови у пациентов основной группы (третий месяцтерапии) и контрольной группы (АЛТ, АСТ, общий билирубин).
№ Показатели общего анализа крови Основная группа(n=50) Контрольная группа (n=30)
День 60 День 0 День 60
1 АЛТ (ммоль\л) 17,8±6,9 16,6±6,9 26,2±6,9
2 АСТ (ммоль 17,9±5,5 18,5±5,5 21,7±6,5
3 Общий билирубин 16,5±3,9 11,9±3,9 11,9±3,9
4 Общий белок (ммоль\л) 71,7±8,8 71,7±8,5 -
5 Глюкоза (ммоль\л) 5,2±1,6 4,8±1,6 -
6 Креатинин (ммоль\л) 62,02±1,2 65,6±1,2 -
7 Мочевина (ммоль\л) 3,9±1,0 3,69±1,0 -
Как видно из приведенных выше данных, основные биохимические показатели крови во время скрининга и в течении трех месяцев применения Бета-глюкана, оставались в пределах нормативных значений. Из этого можно сделать вывод, что Бета-глюкан не оказывает токсического действия.
При сравнении таких биохимических показателей как: АЛТ, АСТ, общий билирубин в основной и контрольной группе за 60 дней, было установлено, что в основной группе отмечается статистически значимое (p<0,05) более выраженная стабилизация показателей АЛТ, АСТ. Показатели контрольной группы оценивались ретроспективно. Оценивая динамику основных ферментов печени в основной и контрольной группах можно сделать вывод, что Бета-глюкан, оказывает гепатопротекторное действие на клетки печени.
В связи с тем, что основная часть пациентов из опытной группы-это больные с гемобластозами, то оценка показателей общего анализа крови проводилась с учетом основного заболевания (различные типы лейкозов) и проводимой полихимиотерапии. Данные общего анализа крови пациентов во время скрининга и в течении трех месяцев применения Бета-глюкана представлены в таблицах 8-10, а также в диаграммах 17 – 20.
Таблица 8. Динамика общего анализа крови у пациентов основной группы (первый месяц терапии)
№ Показатели общего анализа крови Основная группа(n=50)
День 0 День 30
1 Гемоглобин (г\л) 106,7±11,4 111,1±5,5
2 Эритроциты (х 1012/л) 3,9±0,8 4,1±0,5
3 Тромбоциты ( х 109/л) 191,9±41,2 194,9±37,7
4 СОЭ (мм\ч) 27,1±7,9 25,4±7,5
Таблица 9. Динамика общего анализа крови у пациентов основной группы (второй месяц терапии)
№ Показатели общего анализа крови Основная группа(n=50)
День 30 День 60
1 Гемоглобин (г\л) 111,1±5,5 113,7±5,4
2 Эритроциты (х 1012/л) 4,1±0,5 4,2±0,3
3 Тромбоциты ( х 109/л) 194,9±37,7 201,4±35,7
4 СОЭ (мм\ч) 25,4±7,5 24,1±7,4
Таблица 10. Динамика общего анализа крови у пациентов основной группы (третий месяц терапии)
№ Показатели общего анализа крови Основная группа(n=50)
День 60 День 90
1 Гемоглобин (г\л) 113,7±5,4 114,7±5,7
2 Эритроциты (х 1012/л) 4,2±0,3 4,03±0,5
3 Тромбоциты ( х 109/л) 201,4±35,7 201±35,6
4 СОЭ (мм\ч) 24,1±7,4 18,5±7,3
Приведенные данные показывают, что все гематологические показатели по окончании трех месяцев применения Бета-глюкана находились в пределах значений, которые должны быть достигнуты по завершении курса полихимиотерапии. Это свидетельствует о том, что применение Бета-глюкана не влияло на положительные результаты стандартного лечения больных с онкопатологией.
Для того, чтобы оценить переносимость полихимиотерапии у основной группы пациентов с онкопатологией в качестве группы контроля были выбраны аналогичные пациенты, которые получали такую же стандартное терапию, но без использования в комплексном лечении Бета-глюкана. Основные жалобы во время проведения полихимиотерапии представлены в таблице 11.
Таблица 11. Динамика общего состояния пациентов, находящихся на полихимиотерапии в основной и контрольной группах
№ Жалобы Основная группа
(n=50) Контрольная группа
(n=20)
День 0 День 90 День 0 День 90
1. Повышенная утомляемость, слабость 100%(абс.50) 40% (абс.20) 100%(абс.50) 60% (абс.30)
2. Головокружение 100%(абс.50) 50% (абс.25) 100%(абс.50) 56% (абс.28)
3. Снижение аппетита 100%(абс.50) 30% (абс.15) 100%(абс.50) 44% (абс.22)
4. Тошнота 100%(абс.50) 34% (абс.17) 100%(абс.50) 40% (абс.20)
5. Рвота 100%(абс.50) 56% (абс.28) 100%(абс.50) 44% (абс.22)
6. Диарея 100%(абс.50) 44% (абс.22) 100%(абс.50) 60%(абс.30)
7. Алопеция 60%(абс.30) 20%(абс.10) 100%(абс.50) 50%(абс.25)
Жалобы пациентов во время проведения полихимиотерапии в основной и контрольной группе, представленные в таблице, предъявляли 100% больных. Однако, по завершении исследования (3 месяца терапии), жалобы на слабость и повышенную утомляемость предъявляли 60% больных в группе сравнения, тогда как в основной группе они регистрировались только у 40%(p <0,01). Такие жалобы, как снижение аппетита и тошнота в основной группе регистрировались, соответственно у 30% и 34% пациентов, тогда как в группе сравнения у 44% и 40% соответственно, что достоверно выше, чем в опытной группе (p <0,05).
Также, проводилась оценка переносимости Бета-глюкана. Оценку было предложено провести исследователю и исследуемому пациенту. Данные оценки исследователя приведены в таблице 12.
Таблица 12. Оценка переносимости Бета-глюкана.
Количество пациентов Плохо Удовлетворительно Хорошо Очень хорошо
50 - 5 35 10
По мнению исследователя: у 5 пациентов переносимость Бета-глюкана - удовлетворительная. У 35 пациентов переносимость исследуемого Бета-глюкана - хорошая, 10 пациентов оценили переносимость, как отличная.
Таким образом, исследователем отмечена хорошая и очень хорошая переносимость Бета-глюкана.
Оценку переносимости также было предложено провести исследуемым пациентам самостоятельно. Пациентам было предложено ответить на вопрос («Как Вы оцениваете Ваше самочувствие после приема Бета-глюкана?»), оформленный в виде открытого тестового с четырьмя ответами («Плохо», «Удовлетворительно», «Хорошо» и «Отлично»).
Таким образом, результаты проведенного исследования указывают на хорошую переносимость исследуемого Бета-глюкана, а также отсутствие зарегистрированных сообщений о нежелательных реакциях или побочных эффектах, связанных или не связанных с приемом Бета-глюкана, можно сделать заключение, что исследуемый Бета-глюкан является безопасным для применения в рамках показаний, указанных в инструкции.
ВЫВОДЫ:
1. Переносимость Бета-глюкана пациентами, получавших ПХТ на протяжении трех месяцев оценена как хорошая, побочных эффектов таких как диспепсические расстройства, аллергические реакций не было отмечено, что в первую очередь обусловлено антиоксидантным действием Бета-глюкана.
2. Применение Бета-глюкана способствует коррекции и улучшению иммунных показателей больных раком в период реабилитации после применения курсов базовой терапии, причем, у пациентов с наиболее «грубыми» нарушениями в иммунограмме.
3.Установлено, что применение Бета-глюкана оказывает гепатопротекторное действие у пациентов, получающих длительные курсы полихимиотерапии.
4. Исследование фагоцитарной активности у пациентов с гемобластозами показало, что в течение периода терапии наблюдается ее усиление, что ассоцировано активацией индекса переваривающей способности фагоцитов, показатель которого варьировал в период наблюдения с 78,9±7,3% до 80,2±5,3%.
5.При применении Бета-глюкана статистически значимых негативных изменений в динамике титров онкомаркеров не выявлено.
Список использованной литературы:
1. Беседнова Н. Н., Иванушко Л. А., Звягинцева Т. Н. и др. Иммунотропные свойства 1,3/1,6"β"D"глюканов / // Антибиотики и химиотерапия. — 2000. — № 2. — С. 37—44.
2. Analysis of the sugar specificity and molecular location of the beta"glucan" binding lectin site of complement receptor type 3 (CD11b/CD18) / Thornton B. P., Vetvicka V., Pitman M. [et al.] // J. Immunol. — 1996. — Vol. 156 (3). — P. 1235—1246.
3. Bohn J. A. (1">3)"β"d"Glucans as biological response modifiers: a review of structure"functional activity relationships / J. A. Bohn, J. N. BeMille // Carbohydrate Polymers. — 1995. — Vol. 28 (1). — P. 3—14.
4. Dectin"1 is a major beta"glucan receptor on macrophages / Brown G. D., Taylor P. R., Reid D. M. [et al.] // J. Exp. Med. — 2002. — Vol. 196 (3). — P. 407—412.
5.
